實(shí)驗(yàn)原理
ChIP與第二代測(cè)序技術(shù)相結(jié)合的ChIP-Seq技術(shù),能夠高效地在全基因組范圍內(nèi)檢測(cè)與組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等互作的DNA區(qū)段,研究體內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子和靶基因啟動(dòng)子區(qū)域直接相互作用的方法,對(duì)調(diào)控蛋白在基因組上的結(jié)合靶點(diǎn)篩選、差異化表觀遺傳變異的原理揭示提供了重要的解決思路。
實(shí)驗(yàn)步驟
適用研究
篩選調(diào)控蛋白在基因組上的結(jié)合靶點(diǎn),揭示差異化表觀遺傳變異的原理,研究表觀遺傳變異疾病
樣本要求
目的基因或轉(zhuǎn)錄因子的相關(guān)背景資料;動(dòng)物:細(xì)胞系、低脂肪含量組織液氮速凍樣本(細(xì)胞數(shù)大于5×106個(gè));
樣品運(yùn)輸:干冰運(yùn)輸,建議用滅菌的樣品袋或LoBind 管,parafilm將管口密封好。
結(jié)果提供
ChIP-DNA:分布在100~500bp范圍,且主要片段在~250bp;總量≥5ng;Input率;
陰性對(duì)照抗體對(duì)目的片段的富集程度小于檢測(cè)抗體2倍以上。